Високоефективна рідинна хроматографія (ВЕРХ), також відома як рідинна хроматографія високого тиску, представляє собою передовий аналітичний метод, який знаходить широке застосування в сучасних лабораторіях. ВЕРХ дозволяє одночасно розділяти складні проби на їх складові компоненти, визначати більшість компонентів і вимірювати концентрацію одного або кількох сполук, залежно від конкретних аналітичних завдань та наявності стандартних зразків.
Цей метод широко використовується в таких галузях як екологія, санітарно-гігієнічні та ветеринарні дослідження, контроль якості та сертифікація харчової та сільськогосподарської продукції, медицина, фармацевтика, нафтохімія, криміналістика і багато інших.
ВЕРХ використовує блочно-модульну хроматографічну систему, де рідка рухома фаза (елюент) з певним складом (зазвичай з 2-3 компонентів) під високим тиском (зазвичай від 50 до 200 атмосфер) подається через хроматографічну колонку. Колонка – це сталева трубка довжиною від 50 до 250 мм і внутрішнім діаметром від 2 до 5 мм, яка заповнена однорідними частинками сорбенту діаметром від 3 до 10 мкм. Сорбенти можуть бути адсорбентами з розвиненою поверхнею або нерухомими рідкими фазами, що є прив’язаними до поверхні твердого носія (хімічно модифіковані сорбенти).
Рідинні хроматографи, колонки та інші витратні матеріали для ВЕРХ ви знайдете на сайті img.ua.
Після відповідної підготовки проби визначені компоненти вводяться у складі аналізованої проби об’ємом від 10 до 100 мкл у хроматографічну колонку за допомогою спеціального дозуючого пристрою. Під час руху вздовж шару сорбенту компоненти проби багаторазово адсорбуються нерухомою фазою, а потім десорбуються. Завдяки різній афінності до сорбенту, різні сполуки рухаються по колонці з різною швидкістю та досягають детектора в різний час. Детектування зазвичай виконується шляхом реєстрації поглинання в УФ-або видимій області спектру або вимірювання флуоресценції (або власної флуоресценції аналізованої речовини або флуоресценції відповідних похідних, якщо сама сполука не флуоресцює). За допомогою комп’ютерної системи збору та обробки даних проводиться ідентифікація компонентів аналізованої суміші за часом утримування та їх кількісне визначення за величиною аналітичного сигналу (висота або площа піку на хроматограмі).
У вирішенні найбільш складних аналітичних завдань, коли необхідно визначати низькі концентрації сполук з малими значеннями ГДК (поліциклічні ароматичні вуглеводні, токсини) у складних пробах різного складу (харчові продукти, грунти), ключовими характеристиками аналітичного обладнання ВЕРХ є:
- Ефективність та селективність хроматографічного поділу, які досягаються завдяки правильному вибору характеристик хроматографічної колонки (сорбент, довжина колонки) та умов хроматографування (склад рухомої фази, об’ємна швидкість подачі через колонку, градієнтна техніка елюювання), що дозволяє відділити цільові сполуки від матричних та супутніх компонентів проби.
- Селективність та чутливість детектування, які досягаються за допомогою відповідного хроматографічного детектора (флуориметричного, спектрофлуориметричного або спектрофотометричного), встановленням оптимальних параметрів детектування (довжини хвиль збудження, флуоресценція або поглинання). Це дозволяє отримати низькі межі виявлення, і у разі потреби може бути проведена селективна реєстрація аналізованих речовин на фоні матричних та супутніх компонентів проби.
Для підвищення ефективності хроматографічного поділу та зменшення тривалості аналізу рекомендується використовувати термостатування колонок при температурі до 60°C. Блоково-модульний підхід у будові хроматографічних систем дозволяє створювати індивідуальні конфігурації для вирішення конкретних аналітичних завдань користувача.
